ABSTRACT
La irradiación con luz ultravioleta a - 70-C de DNA transformante desnaturalizado, el cual fue posteriormente sonicado y renaturalizado con DNA no irradiado, así como el DNA no irradiado y sometido a los otros tratamientos, provocaron un fuerte efecto letal sobre H. influenzae, el cual fue detecto al efectuarse la cuenta viable de las mezclas de transformación, encontrándose la disminución de la viabilidad de las células de un 98% para el caso del DNA irradiado y de un 97.2% para el DNA sin irradiar. Pensamos que la letalidad pueda deberse, tanto a la integración al genóforo de la célula receptora de los marcadores letales provados por la luz UV, como a la activación de un fago defectuoso causada por la penetración del DNA transformante irradiado o no con luz UV. La irradiación con luz UV del DNA transformante desnaturalizado, el cual fue renaturalizado consifo mismo, hizo aumentar ligeramente el número de mutantes resistentes a Kanamicina en células competentes de H. influenzae. Al someterse a lisis sónica del DNA irradiado, antes de renaturalizarse con DNA no irradiado, el resultaod obtenido fue aproximadamente el mismo que en el caso anterior. Sin embargo, cuando el número de mutantes resistentes a novobiocina se corrigió por la cuenta viable de la mezcla de transformación y el efecto mutagenético se cuantificó con relación a las frecuencias de mutación, encontramos un aumento de dichas frecuencias de 74 veces respecto a los testigos de células no tratadas con DNA. Este efecto puede, en principio, deberse a la integración en el genoma receptor de las lesiones mutagenéticas causadas por la irradiación con luz UV a - 70-C del DNA transformante, mas la afirmación concluyente de esto, requerirá la demostración de que dicha integración se lleva a cabo. Proponemos que estas lesiones mutagenéticas pudieran ser del tipo 5-timinil-5, 6-dihidrotimina. Fue interesante que del SNA no irradiado con luz UV, provocara también un aumento aunque menor al producido por el DNA irradiado, de las frecuencias de mutación. La explicación de este hecho, necesitará de un análisis experimental detallado posterior, utilizando mutantes rec y uvr de H. influenzae
Subject(s)
Haemophilus influenzae , In Vitro Techniques , Cells , DNA , Kanamycin Resistance , Mutation , Novobiocin , PhotochemotherapyABSTRACT
Las temperaturas de 45, 47, 50 y 55-C mostraron un efecto letal sobre H. influenzae, siendo más acentuado cuando se calentó en un medio sintético que en extracto cerebro-corazón. A 45 y 47-C fue muy notable un "hombro" de resistencia a tiempos cortos de calentamiento. Se observaron dos pendientes de letalidad, lo cual sugiere dos mecanismos de inactivación por el calor y la presencia de procesos reparativos en la célula. La incubación a 37-C en extracto cerebro corazón de células previamente inactivadas a 45 ó 47-C produjo una reversión del efecto letal. La curva de inactivación a 45-C mostró tres zonas el "hombro" inicial de resistencia, en seguida la fase exponencial de inactivación y finalmente otra zona de resistencia entre los 10 y 30 minutos de tratamiento. Esta última zona sugiere la presencia de una mutante termoresistente. Todos los datos anteriores sugieren al ácido desoxirribonucleico como uno de los blancos importantes al tratar a Haemophilus influenzae con el calor
Subject(s)
Hot Temperature , Culture MediaABSTRACT
La luz cercana al ultravioleta (325-420nm) por meio de un efecto independiente del oxigeno, origino una disminucion de la actividad transformante del DNA de H. Influenzae libre de factores fotodinamicos celulares. Dicha disminucion no fue acompanada de gran variacion en el contenido de bases, en comparacion con la muestra de DNA no iluminado. En los hidrolizados de los DNAs aparecio un componente posiblemente nuevo que absorbio luz ultravioleta